細(xì)胞膜熒光探針用于標(biāo)記肌肉膜，并且通過共聚焦激光掃描顯微鏡觀察染料可接近的膜。細(xì)胞膜完整性的喪失是由收縮活性引起的，使得內(nèi)膜的DiOC18（3）染色成為可能。由此產(chǎn)生的染色模式引人注目，細(xì)胞膜受損的纖維很容易與未受損的細(xì)胞膜區(qū)分開來。二十八烷基羰基酞菁高氯酸鹽是陽離子氧雜羰花青染料。已經(jīng)在含有卵磷脂酰膽堿（PC）的水性和非水性介質(zhì)以及不同性質(zhì)的不同溶劑中研究了二十八烷基羰花青菁（一種陽離子氧雜羰花青染料）的吸收和熒光光譜。結(jié)果表明，在PC中，染料在地面和激發(fā)態(tài)中形成復(fù)雜的證據(jù)。染料與PC的激發(fā)態(tài)相互作用表明電子從PC轉(zhuǎn)移到染料，這是由光電化學(xué)電池在光電化學(xué)電池中產(chǎn)生的，光電化學(xué)電池由染料和PC在水介質(zhì)中組成。

 

　　細(xì)胞膜熒光探針的樣本分析：

　　1、制備細(xì)胞膜熒光探針膜染色溶液：

　　a、制備DMSO或EtOH儲備溶液：儲備溶液應(yīng)在DMSO或EtOH中以1-5mM制備；

　　b、準(zhǔn)備工作溶液：將儲備溶液稀釋到合適的緩沖液中，如無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS，制成1至5mM的工作溶液。

 

　　2、將細(xì)胞染成懸浮液：

　　a、在染料工作溶液中懸浮細(xì)胞，細(xì)胞密度為1×106/mL；

　　b、在37°C孵育2-20分鐘，培養(yǎng)時間取決于細(xì)胞類型。首先孵育20分鐘，然后優(yōu)化以獲得均勻的標(biāo)記；

　　c、將標(biāo)記的懸浮管以1000至1500rpm離心5分鐘；

　　d、去除上清液，輕輕地將細(xì)胞重新懸浮在預(yù)熱（37°C）的生長培養(yǎng)基中；

　　e、按步驟c和d洗滌兩次。

 

　　3、染色貼壁細(xì)胞：

　　a、在無菌玻璃蓋玻片上培養(yǎng)貼壁細(xì)胞；

　　b、從生長培養(yǎng)基中取出蓋玻片，去除多余的培養(yǎng)基。將蓋玻片放在濕度箱中；

　　c、將100μL染料工作溶液吸到蓋玻片的角落，輕輕攪拌直至所有細(xì)胞都被覆蓋；

　　d、將蓋玻片在37°C孵育2-20分鐘，培養(yǎng)時間根據(jù)細(xì)胞類型而變化。開始孵育20分鐘，然后優(yōu)化以獲得均勻的標(biāo)記；

　　e、排出染料工作溶液，用生長培養(yǎng)基清洗蓋玻片兩到三次。對于每個洗滌循環(huán)，用預(yù)熱的生長培養(yǎng)基覆蓋細(xì)胞，孵育5-10分鐘，然后去除培養(yǎng)基。

 

　　4、顯微鏡檢測：

　　a、總結(jié)了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR濾波器組的選擇。

　　b、對于同時檢測多種染料，可提供如下多波段濾波器組：

　　①、DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004

　　②、DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007

　　③、DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

 

　　5、流式細(xì)胞儀檢測：

　　用細(xì)胞膜熒光探針標(biāo)記的細(xì)胞可分別使用常規(guī)FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測通道進(jìn)行分析。